一、方法原理

環(huán)境空氣中苯并[a]芘用超細(xì)玻璃或石英纖維濾膜收集，二氯甲烷或乙腈萃取，濃縮純化，高效液相色譜分離，熒光檢測器檢測，保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

二、試劑和材料

除非另有說明在分析中使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑實(shí)驗(yàn)用水是新制備的超純水或蒸餾水。

乙腈（CH3CN）：高效液相色譜純。

正己烷(C6H14)：經(jīng)高效液相色譜純化.

二氯甲烷（CH2Cl2）：高效液相色譜純。

無水硫酸鈉(Na2SO4)：在馬弗爐使用前加熱4小時(shí)。4小時(shí)，冷卻，密封，儲存在玻璃瓶中。

二氯甲烷正己烷混合液：3+7即用。

苯并[A]PYRene標(biāo)準(zhǔn)儲備液：40=100，g·mL，溶劑為乙腈，直接采購許可標(biāo)準(zhǔn)品溶液，參照標(biāo)準(zhǔn)品溶液證書保存。

苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)中間體：ρ=10.0μg/ml。

將1.0 0ml苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)貯存液準(zhǔn)確地除去到10 ml瓶中，體積固定，與乙腈混合。儲存期為1年。

苯并[A]Pyrene的標(biāo)準(zhǔn)品溶液為：0．00～2．00，g·ml～（-1）。

準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移1.00毫升苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)中間體至5毫升容量瓶中，用乙腈稀釋，混勻。密封在4℃以下，避光冷藏6個(gè)月。

過濾膜對0.3μm標(biāo)準(zhǔn)顆粒的截留效率不小于99％，過濾膜在400℃的馬弗爐內(nèi)加熱5小時(shí)以上，冷卻后儲存在過濾膜盒內(nèi)，取樣前和取樣后過濾膜不被污染，取樣前處于平坦?fàn)顟B(tài)。

硅膠固相萃取柱：1000mg/6ml，也可根據(jù)雜質(zhì)含量選擇合適容量的商用固相萃取柱。

有機(jī)相針式過濾器：13mm，0.45μm，聚四氟乙烯或尼龍濾膜。

三、儀器和設(shè)備

高效液相色譜法：具有熒光檢測器和梯度洗脫功能。

色譜柱：4.6mm至250mm，采用ODS-C18（十八烷基硅烷鍵合硅膠）柱或其他類似色譜柱，填料為5.0。mM

采樣器：滿足hj93或HJ/T 374對采樣器的要求大流量采樣器工作點(diǎn)流量為1.05m\179；/min；中流量采樣器工作點(diǎn)流量為100L/min；小流量采樣器工作點(diǎn)流量為16.67L/min..

萃取設(shè)備：低頻超聲波清洗機(jī)、索氏萃取機(jī)或性能類似的加壓流體萃取機(jī)。

濃縮設(shè)備：氮?dú)夥植计?、K-D濃度計(jì)或其他等效設(shè)備。

凈化裝置：固相萃取裝置。

一般實(shí)驗(yàn)室儀器和設(shè)備。

四、樣品

樣品采集

環(huán)境空氣采樣點(diǎn)的布設(shè)應(yīng)符合HJ 194的要求，無組織排放監(jiān)測點(diǎn)的布設(shè)應(yīng)符合HJ/T 55的要求；采集顆粒物的采樣時(shí)間、頻率和粒徑應(yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

采樣時(shí)，用無鋸齒鉗將濾膜放入干凈的濾膜中，濾膜表面朝向進(jìn)氣方向，濾膜被緊密壓縮將濾膜夾放入采樣器中，設(shè)定采樣時(shí)間等參數(shù)，啟動采樣器開始采樣。采樣結(jié)束后，用鑷子取出濾膜，將濾塵向內(nèi)折疊，避免濾塵表面觸及無塵邊，放入收納盒中..

樣品保存

樣品采集后，濾膜密封避光保存迅速送回實(shí)驗(yàn)室20℃下2個(gè)月內(nèi)完成提??；制備好的樣品4℃避光保存，30天內(nèi)完成分析。

試樣的制備

樣品提取

超聲波提取

除去濾膜邊緣無粉塵部分后，將濾膜分成N等份，將其中1份粉碎，放入塞瓶中，加入適量二氯甲烷超聲提取15min，用無水硫酸鈉干燥，轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中，反復(fù)提取三次，合并提取液，濃縮純化一般情況下，整個(gè)直徑為9cm的濾膜每次需要加入35ml的萃取溶劑。

用乙腈萃取濾膜，將碎濾膜放入10 ml瓶塞中，用5.0ml乙腈準(zhǔn)確提取15 min。提取液經(jīng)有機(jī)相針狀濾池過濾后，丟棄初始液體，將濾液收集到樣品瓶中進(jìn)行檢測。

索氏提取

將濾膜放入索氏萃取器，加入100 ml二氯甲烷，提取時(shí)間為16h，回流時(shí)間不少于5次/h。萃取后，冷卻至室溫，取出底瓶，清洗萃取杯接口，將清洗液轉(zhuǎn)移至底瓶。提取液用無水硫酸鈉干燥后轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中濃縮純化..

自動索氏提取

將濾膜放入自動索氏提取器中加入100毫升二氯甲烷回流提取至少40個(gè)循環(huán)。萃取后，冷卻至室溫，取出底瓶，清洗萃取杯接口，將清洗液轉(zhuǎn)移至底瓶。提取液用無水硫酸鈉干燥后轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中濃縮純化..

加壓流體萃取

將過濾膜置于加壓流體提取槽中，將萃取溫度設(shè)定為100℃，壓力為1500Psi2000Psi，靜態(tài)萃取為5分鐘，二氯甲烷的洗脫體積為池中體積的60％，氮?dú)獗淮祾?0s，靜態(tài)萃取至少兩次提取物用無水硫酸鈉干燥，轉(zhuǎn)移到濃縮瓶中進(jìn)行濃縮和純化。

樣品濃縮

在富集裝置中，二氯甲烷樣品萃取液濃縮到45°C以下。溶劑完全轉(zhuǎn)化為正己烷，濃縮為1ml，純化；如果不需要進(jìn)一步凈化，溶劑可轉(zhuǎn)化為乙腈，恒定體積為1.0毫升，并轉(zhuǎn)移到樣品瓶進(jìn)行測試。

樣品凈化

硅膠固相萃取柱固定在凈化裝置上柱床依次用4毫升二氯甲烷和10毫升正己烷清洗.柱填充正己烷后，流量控制閥關(guān)閉.經(jīng)過5 min的潤濕后，控制閥打開，流出液被丟棄。當(dāng)液位略高于柱床時(shí)，將濃縮的樣品提取液移入柱內(nèi)，用1.0ml二氯甲烷正己烷混合液洗滌樣品瓶兩次，將洗滌液一起移入柱內(nèi)，接收出水，用8.0ml二氯甲烷正己烷混合液洗脫，洗滌液流經(jīng)凈化塔后，關(guān)閉流量控制閥，浸泡5分鐘，然后打開控制閥，連接收集洗脫液，直到洗脫液完全流出。

將洗脫液濃縮后，將溶劑轉(zhuǎn)化為乙腈，轉(zhuǎn)化為1.0ml，轉(zhuǎn)移到樣品瓶中進(jìn)行檢測。

五、分析步驟

高效液相色譜儀參考條件

柱溫35℃；進(jìn)樣量10μL；熒光檢測器激發(fā)波長（λEx）/發(fā)射波長（λEM）：305nm/430nm。

流動相A：乙腈；流動相B：水。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

取適量苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，用乙腈稀釋，制成標(biāo)準(zhǔn)系列。質(zhì)量濃度分別為0.025μg/ml、0.050μg/ml、0.100μg/ml、0.500μg/ml、1.00μg/ml和2.00μg/ml。

將標(biāo)準(zhǔn)系列的溶液依次注入高效液相色譜(HPLC)中，并根據(jù)儀器的參考條件進(jìn)行分離和檢測。得到了不同濃度的苯并[A]Pyrene的色譜圖以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰高（或峰面積）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

試樣測定

按與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的儀器條件測定樣品，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰高或峰面積當(dāng)樣品濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍時(shí)，用乙腈稀釋，然后測量。