GB/T 33412—2016 標(biāo)準(zhǔn)概述

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 33412—2016《生物制品中羥基檸檬酸的測(cè)定 高效液相色譜法》規(guī)定了使用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定保?。üδ埽╊惿镏破分辛u基檸檬酸含量的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于口服液、膠囊、顆粒沖劑等生物制品中羥基檸檬酸的檢測(cè)。

標(biāo)準(zhǔn)制定背景

羥基檸檬酸是一種重要的生物活性物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域。為了規(guī)范其在生物制品中的測(cè)定方法，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)管理委員會(huì)組織起草了本標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)基于GB/T1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則》制定，具有科學(xué)性、實(shí)用性和可操作性。

技術(shù)演進(jìn)分析

隨著高效液相色譜技術(shù)的發(fā)展，檢測(cè)方法從傳統(tǒng)的分光光度法逐漸轉(zhuǎn)向更加精確和高效的HPLC方法。本標(biāo)準(zhǔn)采用外標(biāo)法定量，結(jié)合紫外檢測(cè)器，確保了測(cè)定的高靈敏度和準(zhǔn)確性。與以往標(biāo)準(zhǔn)相比，本標(biāo)準(zhǔn)在試劑配制、儀器要求和數(shù)據(jù)處理方面更加精細(xì)化。

標(biāo)準(zhǔn)框架對(duì)比

試劑與儀器要求

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)4.1至5.7條款，檢測(cè)所需的試劑和儀器包括：

• 高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器）
• 分析天平（感量0.01g和0.001g）
• 高速離心機(jī)（10000g）
• 超聲波清洗器
• 甲醇（色譜純）、磷酸、羥基檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)：6205-14-7）等。

測(cè)定步驟解讀

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)7.1至7.3條款，測(cè)定步驟如下：

1. 液相色譜條件：使用Atlantis T3C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為0.1%磷酸水溶液+甲醇（體積比99:1），流量為0.6mL/min，柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：吸取不同濃度的羥基檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，過(guò)濾后進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)不小于0.999。
3. 樣品分析：制備試料溶液，過(guò)濾后在相同條件下測(cè)定，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。

結(jié)果計(jì)算與方法特性

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)8.1至9.3條款，測(cè)定結(jié)果計(jì)算公式如下：

• 固體試樣：ρ = (A - α)/b；w = ρ × V / m
• 液體試樣：ρi = ρ × V / Vi

測(cè)定范圍：進(jìn)樣10μL，在相關(guān)系數(shù)≥0.999的前提下，羥基檸檬酸的線性測(cè)量濃度響應(yīng)范圍為0.1 mg/mL～1.000 mg/mL。

實(shí)施建議

為了確保標(biāo)準(zhǔn)的有效實(shí)施，建議：

• 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備符合要求的儀器設(shè)備，并定期校準(zhǔn)。
• 操作人員需經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，熟悉HPLC和紫外檢測(cè)器的操作。
• 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)配制試劑，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
• 建立質(zhì)量控制體系，定期驗(yàn)證方法的回收率和精密度。