BCA檢測(cè)數(shù)據(jù)計(jì)算
原理簡(jiǎn)介
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量試劑盒是在世界上常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。眾所周知，二價(jià)銅離子在堿性的條件下，可以被蛋白質(zhì)還原成一價(jià)銅離子（biuret reaction），一價(jià)銅離子和獨(dú)特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng)。兩分子的BCA螯合一個(gè)銅離子，形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強(qiáng)烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1．步驟簡(jiǎn)單，45分鐘內(nèi)完成測(cè)定，比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2．靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg，待測(cè)樣品體積為1-20μl 。
3．BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
4．在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
5. 檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。
BCA蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑
在蛋白質(zhì)的表達(dá)純化，結(jié)構(gòu)和功能的研究工作中，蛋白質(zhì)的定量隨處可見。但是，什么是理想的蛋白質(zhì)定量方法？如何準(zhǔn)確、快速的對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量，對(duì)于不同的樣本，如何選取相應(yīng)的蛋白質(zhì)定量試劑和方案？如何避免實(shí)驗(yàn)中引入的其它物質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)定量的干擾，PIERCE為這一切提供了可以信賴的解決方案。
PIERCE的BCA(bicinchoninic acid)蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑是當(dāng)前比Lowry法更優(yōu)越的專用于檢測(cè)總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。該方法以快速靈敏、穩(wěn)定可靠且對(duì)不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)甚小而深受專業(yè)人士的青睞。其中MicroBCA產(chǎn)品可檢測(cè)到0.5μg/ml的微量蛋白，是目前已知的最靈敏的蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑之一。
主要特點(diǎn)：
· 準(zhǔn)確靈敏：BCA試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是20－2000μg/ml,采用加強(qiáng)方法可檢測(cè)到
5μg/ml；MicroBCA試劑測(cè)定范圍是0.5-20μg/ml。
· 快速：45分鐘內(nèi)完成測(cè)定，比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便。
· 經(jīng)濟(jì)實(shí)用：除試管外，測(cè)定可在微孔板中進(jìn)行，大大節(jié)約樣品和試劑用量。
· 不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響。
· 檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考瑪斯亮藍(lán)。
基本原理：
堿性條件下，蛋白將Cu++還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測(cè)定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。
BCA分子式：
原理圖：
用PIERCE的BCA試劑盒所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線：
MicroBCA蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線
BCA蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線
BCA蛋白質(zhì)檢測(cè)流程：
