T/CAICC 03-2021
蔬菜水果中毒死蜱的快速檢測 膠體金免疫層析法

Rapid detection of chlorpyrifos in vegetables and fruits Colloidal gold immunochromatography

被代替

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標(biāo)準(zhǔn)號

T/CAICC 03-2021

發(fā)布

2022年

總頁數(shù)

8頁

發(fā)布單位

中國團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

替代標(biāo)準(zhǔn)

T/CAICC 03-2023

當(dāng)前最新

T/CAICC 03-2023

 

 

引用標(biāo)準(zhǔn)

GB/T 6682

適用范圍

3　原理 本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的毒死蜱經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和試紙條中檢測線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對樣品中毒死蜱進(jìn)行定性判定。 4　試劑與材料 4.1　試劑 除另有說明外，所有試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T 6682中二級水的要求。 4.1.1　甲醇（CH3OH）。 4.1.2　提取液：由膠體金免疫層析試紙條配套提供，或按照其說明書配制。 4.1.3　參考物質(zhì)：毒死蜱參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥98%。 表1　毒死蜱參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量 中文名稱　英文名稱　CAS登錄號　分子式　相對分子質(zhì)量 毒死蜱　Chlorpyrifos　2921-88-2　C9H11Cl3NO3PS　350.6 注：或等同可溯源物質(zhì)。 4.2　溶液配制 4.2.1　毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100 μg/mL）：準(zhǔn)確稱取毒死蜱參考物質(zhì)（4.1.3）1 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.1.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為100 μg/mL的毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)儲備液。4℃避光保存，有效期6個月。 4.2.2　毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)工作液（1 μg/mL）：精密移取毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100 μg/mL）（4.2.1）0.1 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.1.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1 μg/mL的毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新配。 4.3　材料 毒死蜱膠體金免疫層析試紙條，適用基質(zhì)為蔬菜水果。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。 4.3.1　金標(biāo)微孔（含膠體金標(biāo)記的特異性抗體）。 4.3.2　檢測卡。 5　儀器與設(shè)備 5.1　電子天平：感量為0.01 g。 5.2　移液器：10 μL~200 μL、100 μL~1000 μL。 6　分析步驟 6.1　試樣制備 選取新鮮樣品，擦去表面泥土，剪成1 cm左右見方碎片，備用。 6.2　試樣提取 稱取2 g試樣（精確至0.05 g）放入離心管中，加入6 mL提取液（4.1.2），上下振蕩1 min，靜置5 min，上清液即為樣品待測液。 6.3　測定步驟 吸取100 μL樣品待測液于金標(biāo)微孔（4.3.1）中，抽吸2~3次使混合均勻，室溫溫育3 min，吸取100 μL混勻液加入檢測卡的加樣孔中，室溫反應(yīng)10 min后進(jìn)行結(jié)果判定。 注1：測定步驟建議按照試紙條說明書。 注2：結(jié)果判定建議使用讀數(shù)儀，讀數(shù)儀的具體使用參照儀器使用說明書。 6.4　質(zhì)控試驗(yàn) 每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。 6.4.1　空白試驗(yàn) 稱取空白試樣，按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。 6.4.2　加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取空白試樣2 g（精確至0.05 g）放入離心管中，加入40 μL毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)工作液（1 μg/mL）（4.2.2），使試樣中毒死蜱濃度為0.02 mg/kg，按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。 7　結(jié)果判定 7.1　讀數(shù)儀測定 按讀數(shù)儀說明書要求操作，直接讀數(shù)并進(jìn)行結(jié)果判定。 7.2　目視判定 通過對比質(zhì)控線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示意圖見圖1。 7.2.1　無效 質(zhì)控線（C線）不顯色，無論檢測線（T線）是否顯色，表明操作不正確或試紙條已失效，檢測結(jié)果無效。 7.2.2　陽性結(jié)果 質(zhì)控線（C線）顯色，檢測線（T線）不顯色或顏色淺于質(zhì)控線（C線），表明樣品中毒死蜱含量高于方法檢出限，判定為陽性。 7.2.3　陰性結(jié)果 質(zhì)控線（C線）顯色，檢測線（T線）顏色深于質(zhì)控線（C線）或與質(zhì)控線（C線）顏色基本一致，表明樣品中毒死蜱含量低于方法檢出限，判定為陰性。 圖1　目視判定示意圖 7.3　質(zhì)控試驗(yàn)要求 空白試驗(yàn)測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測定結(jié)果應(yīng)為陽性。 8　結(jié)果確認(rèn) 當(dāng)檢測結(jié)果為陽性時(shí)，應(yīng)按照GB 2763指定方法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確證。 9　性能指標(biāo) 9.1　檢出限：0.02 mg/kg。 9.2　靈敏度：≥95%。 9.3　特異性：≥90%。 9.4　假陰性率：≤5%。 9.5　假陽性率：≤10%。 注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。 10　其他 本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者應(yīng)使用經(jīng)過驗(yàn)證的滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)的試劑、試紙條。

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